NAD-蘋果酸酶（NAD-ME）測試盒

產(chǎn)品簡介
蘋果酸酶是生物體內(nèi)重要的酶之一，廣泛存在于動物、植物、細(xì)菌體中。是蘋果酸代謝的關(guān)鍵酶。近年來植物ME活性測定較多，已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點。該酶發(fā)揮作用需要輔酶因子的參與，依據(jù)輔酶因子的不同，分為NAD-ME(EC 1.1.1.38)和NADP-ME(EC 1.1.1.40)。
ME的主要功能是催化蘋果酸氧化脫羧產(chǎn)生酸和CO2，以及伴隨NAD(P)+的還原反應(yīng)，NADP-ME催化NAD+還原成NADH，本試劑盒通過檢測NADH在340nm處的增加速率即可得出NAD-ME的酶活性大小。

中文名稱NAD-蘋果酸酶(NAD-ME)活性檢測試劑盒
儲存條件-20℃
有效期6個月
英文名稱NAD Malic Enzyme(NAD-ME) Activity Assay Kit
別名NAD-蘋果酸酶試劑盒 NAD-ME Kit NAD-蘋果酸酶（NAD-ME）試劑盒 NAD-蘋果酸酶（NAD-ME）測試盒
檢測方法微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader；紫外分光光度法 Spectrophotometer

測定意義
   ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng)，產(chǎn)生酸和CO2，以及伴隨NAD(P)+的還原反應(yīng)，是蘋果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來植物ME活性測定較多，已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同，可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。

測定原理
   NAD-ME催化NAD+還原成NADH，在340nm下測定NADH增加速率。
需要的儀器，耗材:紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
以上數(shù)據(jù)均來自公開文獻(xiàn), 僅供參考。

樣本測定的準(zhǔn)備:
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個):試劑一體積(mL)為 1000~2000:1 的比例(建議 2000 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。

NAD-蘋果酸酶（NAD-ME）測試盒
檢測方法:微量法
本品僅用于科研實驗,不用于臨床。

生化檢測試劑盒的基本原理
 生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學(xué)及化學(xué)反應(yīng)等技術(shù)制備的試劑盒,用于檢測生理學(xué)、病理學(xué)、藥理學(xué)等領(lǐng)域中特定的生物分子或化學(xué)物質(zhì)。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中的是底物-酶法.
底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細(xì)胞膜上結(jié)合形成基質(zhì)酶,進(jìn)而形成庇物-酶復(fù)合物。隨著時間的推移,底物-酶復(fù)合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未消化的底物,未消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產(chǎn)物都會對復(fù)合物的穩(wěn)定性產(chǎn)生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結(jié)果。

生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?
 生化試劑盒的實驗原理是基于化學(xué)反應(yīng),理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型不分種屬。但是某些指標(biāo)在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術(shù)支持聯(lián)系確認(rèn)。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:
1)于生化檢測而言,樣本最-好無溶血、脂血、黃-熱的現(xiàn)象,組織樣本需將血液洗凈擦干后再進(jìn)行稱重處理。

2)樣本處理后最-好盡快進(jìn)行檢測,且保存于冰盒之上,待測。
3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進(jìn)行檢測(特殊指標(biāo)除外)。
4)樣本值應(yīng)在試劑盒線性范圍內(nèi),若超過線性范圍,需稀釋后再進(jìn)行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進(jìn)行檢測。

蘋果酸酶 malic enzyme
已知有三種蘋果酸酶（ME1．1．1．38—40）。其中以NADP為受體的酶（ME1．1．1．40）催化生成下列反應(yīng)：
ΔG°′=-0.36千卡。酸羧化反應(yīng)（是H．G．Wood和C．H．Werkman，1938最初發(fā)現(xiàn)的反應(yīng)）中有的是蘋果酸酶的作用，有的是酸羧化酶的作用，在生物體內(nèi)已知以后者的作用為主。兩者都是供給三羧酸循環(huán)中間體的補充反應(yīng)。蘋果酸酶在胞漿內(nèi)催化蘋果酸脫羧是乙酰CoA從線粒體進(jìn)入胞漿的檸檬酸--酸循環(huán)的一部分，其產(chǎn)生的NADPH很多將用于脂肪酸的合成。
ME1是一種普遍存在的四聚體蛋白，可以催化可逆的氧化脫羧反應(yīng)的L-蘋果酸轉(zhuǎn)變?yōu)樗?，這個反應(yīng)涉及到了NAD(P)+ 向 NAD(P)H的轉(zhuǎn)化，將糖酵解途徑和檸檬酸循環(huán)聯(lián)系起來。