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簡(jiǎn)要描述:猴泛素蛋白(Ub)ELISA試劑盒 我司提供免費(fèi)代測(cè),委托單位的試驗(yàn)材料和試劑等均須采用特快專遞形式郵寄,有低溫要求的、固定要求的,按低溫保存、固定防碎方法運(yùn)輸,以確保實(shí)驗(yàn)樣本的安全。如數(shù)量巨大,我司可以讓專業(yè)人員前往提取。詳情請(qǐng)與我司銷售人員聯(lián)系。
猴泛素蛋白(Ub)ELISA試劑盒
ELISA試劑盒組成
試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
說明書 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片(48) | 2片(96) | |
密封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) | |
酶標(biāo)包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品:36U/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶標(biāo)試劑 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
說明書 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片(48) | 2片(96) |
ELISA實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒基于檢測(cè)樣本的特異性抗體包被酶標(biāo)板,加入待測(cè)樣本,樣本與包被在酶標(biāo)板上的特異性抗體結(jié)合,形成免疫復(fù)合物。清洗后加入酶標(biāo)二抗,與免疫復(fù)合物結(jié)合,形成完整的三明治復(fù)合物。再加入底物溶液,底物在酶的作用下變色,顏色的深淺與樣本的濃度呈正相關(guān)。最后加入終止液,使反應(yīng)停止,在450nm波長(zhǎng)下測(cè)量各孔的光密度值(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本的濃度。
操作步驟
1. 加樣:設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔和待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl。注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。每次實(shí)驗(yàn)都應(yīng)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果樣品濃度過高,可以用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物su標(biāo)記抗體工作液 100μl(取1μl生物su標(biāo)記抗體加99μl生物su標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),37℃,60分鐘。溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
3. 每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同生物su標(biāo)記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
4. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
5. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
6. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
猴泛素蛋白(Ub)ELISA試劑盒
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的計(jì)算處理方法
1、擬和曲線:
輸入第一行: 濃度值, 如0 10 50 100 400
輸入第二行:該濃度下的調(diào)整后的od值,如0 0.586 1.397 1.997 3.42
選擇這些輸入的數(shù)據(jù),用插入里的圖表按鈕,進(jìn)入圖表向?qū)?,在“?biāo)準(zhǔn)類型"中選擇“xy散點(diǎn)圖";在“子圖表類型"中選擇“折線散點(diǎn)圖",按“下一步";選擇“系列產(chǎn)生在行",按“下一步";數(shù)據(jù)標(biāo)志,可以填寫:如數(shù)據(jù)y軸,OD值;數(shù)據(jù)x軸,濃度;按下一步,點(diǎn)擊完成??傻们€圖。
單擊曲線,按右鍵,選擇“添加趨勢(shì)線",在類型中,選擇多項(xiàng)式;在選項(xiàng)中,選擇顯示公式,選擇顯示R平方值。
得到公式和R平方值。
也可以用上面說的方法: 雙擊圖表,把它輸入到圖表的數(shù)據(jù)中,就可以擬和曲線。
2、計(jì)算濃度:
第一次實(shí)驗(yàn):
標(biāo)準(zhǔn)曲線為:
y = -4E-05x2 + 0.026x
R2 = 0.9745
為例,已知OD值,計(jì)算濃度。
由于y = -4E-05x2 + 0.026x,可以得到:
4E-05x2 -0.026x +y=0
ax2 +bx +y=0
操作注意事項(xiàng)
1. 試劑盒保存在 2-8℃,使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用。
2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
3. 濃度為 0 的標(biāo)準(zhǔn)品可視為陰性對(duì)照或者空白;按照說明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋 5 倍,終結(jié)果乘以5才是樣本終濃度。
4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
6. 若中英文說明書有誤,請(qǐng)以中文說明書為準(zhǔn)。
7. 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按 1:20 稀釋,即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。
8. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
產(chǎn)品包裝:盒裝
性狀:瓶裝液體
規(guī)格:96T/48T
保存條件:2-8℃
保存期限:6個(gè)月
運(yùn)輸條件:2-8℃低溫運(yùn)輸,用干冰或者生物冰袋低溫運(yùn)輸。
組織勻漿
1) 用預(yù)冷的PBS(0.01M,PH7.4)沖洗組織以除去表面殘留的血液或雜質(zhì)(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果)。
2) 將組織塊稱重,然后切成盡可能小的碎塊,以便充分勻漿。
3) 加入適量的預(yù)冷PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑),用玻璃勻漿器在冰上或冰浴中充分勻漿。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。
4) 將勻漿液吸入離心管中,2-8℃下以5000×g離心5分鐘,收集上清液,保存至-20℃或-80℃,避免反復(fù)凍融。
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