人視神經(jīng)緯縮癥蛋白1 ELISA檢測試劑盒

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被視神經(jīng)wei蓑癥蛋白1（OPA1）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的視神經(jīng)wei蓑癥蛋白1（OPA1）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

試劑盒組成

注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、5、10、20、40、80 ng/ml

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項(xiàng)

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用。

2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.  濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

4.  嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑的準(zhǔn)備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.  自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟

1. 準(zhǔn)備工作

（1）將試劑盒從冰箱中取出，放置至室溫；

（2）準(zhǔn)備所需的試劑和樣品；

（3）將酶標(biāo)板用洗滌液清洗干凈。

2. 包被抗原

（1）將抗原按照說明書要求稀釋后，加入酶標(biāo)板孔中，每孔100μL；

（2）將酶標(biāo)板輕輕搖晃，使抗原充分覆蓋酶標(biāo)板孔底部；

（3）將酶標(biāo)板放入濕盒中，4℃孵育過夜。

3. 洗滌和干燥

（1）取出酶標(biāo)板，用洗滌液清洗5次，每次清洗時(shí)間為1分鐘；

（2）用吸水紙輕輕吸干酶標(biāo)板表面的水分。

4. 加樣和孵育

（1）在每個(gè)酶標(biāo)板孔中加入100μL待測血清；

（2）將酶標(biāo)板輕輕搖晃，使血清充分覆蓋抗原；

（3）將酶標(biāo)板放入濕盒中，37℃孵育1小時(shí)。 

5. 洗滌和干燥

（1）取出酶標(biāo)板，用洗滌液清洗5次，每次清洗時(shí)間為1分鐘；

（2）用吸水紙輕輕吸干酶標(biāo)板表面的水分。

6. 加酶標(biāo)抗體

（1）在每個(gè)酶標(biāo)板孔中加入100μL酶標(biāo)抗體；

（2）將酶標(biāo)板輕輕搖晃，使酶標(biāo)抗體充分覆蓋抗原；

（3）將酶標(biāo)板放入濕盒中，37℃孵育1小時(shí)。

7. 洗滌和干燥

（1）取出酶標(biāo)板，用洗滌液清洗5次，每次清洗時(shí)間為1分鐘；

（2）用吸水紙輕輕吸干酶標(biāo)板表面的水分。

8. 加底物顯色

（1）在每個(gè)酶標(biāo)板孔中加入100μL底物溶液；

（2）將酶標(biāo)板輕輕搖晃，使底物溶液充分覆蓋抗原；

（3）將酶標(biāo)板放入濕盒中，37℃孵育15-30分鐘。

9. 終止反應(yīng)并測量吸光度值

（1）在每個(gè)酶標(biāo)板孔中加入50μL終止液；

（2）立即用酶標(biāo)儀測量各孔的吸光度值。

人視神經(jīng)緯縮癥蛋白1 ELISA檢測試劑盒

結(jié)果判斷

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

試劑盒性能

1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。

2. 靈敏度：檢測濃度小于1.0 ng/ml。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6. 有效期：6個(gè)月

免責(zé)聲明

1.  試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。

2.  嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。

SNAI 1 抗體 G-7 是小鼠單克隆 IgG1 κ，SNAI 1抗體, 在115篇文獻(xiàn)中引用，規(guī)格為200 µg/ml

特異性抗原位于human物種的SNAI 1的內(nèi)部區(qū)域內(nèi)的氨基酸113-139之間

SNAI 1 抗體 (G-7) 推薦用于 WB, IP, IF, IHC(P) 和 ELISA，檢測mouse, rat 和human 來源的 SNAI 1

抗-SNAI 1 抗體 (G-7) 可偶聯(lián) 瓊脂糖 用于 IP; HRP 用于 WB, IHC(P) 和 ELISA; 還可偶聯(lián) 藻紅蛋白 或者 FITC 用于 IF, IHC(P) 和 FCM

還可偶聯(lián)Alexa Fluor® 488, Alexa Fluor® 546, Alexa Fluor® 594 和 Alexa Fluor® 647，用于WB (RGB), IF, IHC(P) 和 FCM, 以及用于RGB熒光成像系統(tǒng)，例如iBright™ FL1000, FluorChem™, Typhoon, Azure和其他類似的系統(tǒng)

還可偶聯(lián)Alexa Fluor® 680 和 Alexa Fluor® 790， 用于WB (NIR), IF 和 FCM; 以及用于近紅外（NIR）檢測系統(tǒng)，如LI-COR®/Odyssey®, iBright™ FL1000, FluorChem™, Typhoon, Azure和類似系統(tǒng)

可用于凝膠遷移和ChIP的TransCruz試劑(sc-271977 X, 200 µg/0.1 ml)